PCR

A PCR (Reacção de Polimerização em Cadeia) é uma metodologia que se baseia na amplificação exponencial selectiva de uma quantidade reduzida de DNA de uma única célula. Esta técnica revolucionou o mundo científico e as suas aplicações são imensas: é usada no diagnóstico médico, mapeamento genético, detecção de doenças hereditárias, clonagem de genes, testes de paternidade, identificação de “impressões digitais” genéticas.
O objectivo da PCR é produzir uma quantidade apreciável de um segmento específico de DNA a partir de uma quantidade mínima. O DNA molde sofre uma amplificação controlada por enzimas, obtendo-se milhões de cópias do fragmento de DNA de interesse. O molde pode ser qualquer forma de DNA de cadeia dupla, como o DNA genómico: pode usar-se uma gota de sangue, um fio de cabelo, uma célula do epitélio oral, um blastómero…

DNA complementar.

DNA complementar (cDNA)
· Molécula de DNA obtida a partir da
transcrição reversa de moléculas de
RNA mensageiro (RNAm) funcional.

Processo para obtenção de
cDNA
1. Isola-se uma molécula de
RNAm funcional, ou seja, uma
molécula de RNA constituída
apenas por exões, das células;
2. Adiciona-se a enzima
transcriptase reversa e
nucleótidos livres. A enzima
catalisa a formação da cadeia
simples de DNA a partir do
RNAm;
3. No final, junta-se uma
enzima que degrada o RNAm e
promove-se a replicação do
DNA.

Depois do RNAm ser transformado
em cDNA, o cDNA é clonado por
vectores apropriados, como os
plasmídeos e os vírus gerando uma
colecção de genes expressos.

Bactérias.

As bactérias são microrganismos unicelulares, com uma estrutura muito elementar. Abundantes no ar, no solo e na água, a maior parte das bactérias é inócua para o homem, tanto que algumas espécies estão normalmente presentes na pele e no interior do intestino, sem causarem doença. Pelo contrário, em especial as bactérias do intestino, são úteis, na medida em que produzem algumas vitaminas e, com a sua presença, protegem o organismo da invasão de bactérias nocivas ou patogénicas. As bactérias patogénicas são responsáveis pela maior parte das doenças infecciosas que nos afectam.

O que ainda não se conseguiu estabelecer com segurança é a razão pela qual certos indivíduos adoecem, enquanto que outros permanecem saudáveis, tendo estado expostos às mesmas fontes de infecção. As bactérias produzem toxinas prejudiciais às células humanas. A doença surge quando estas toxinas estão presentes em quantidade suficiente e o indivíduo afectado não está imunizado. Entre as muitas doenças provocadas por bactérias incluem-se a pneumonia, a amigdalite, a meningite, a tuberculose, o tétano e a disenteria.

Aula pratica 19/02/2008

Na primeira parte parte da aula falanos sober os trabalhos.
Na segunda parte da aula acaba nos a realização do relatorio.

DNA reconbinante.

Uma enzima de restrição particular reconhece somente uma seqüência única de bases. DNA de origem diferente sob a ação da mesma enzima de restrição produzem fragmentos com o mesmo conjunto de extremidades fitas simples. Portanto, fragmentos de dois diferentes organismos (por exemplo, bactéria e homem) podem ser ligados por renaturação das regiões de fita simples. Além disto, se a ligação for "selada" com a enzima DNA ligase, depois do pareamento de bases, os fragmentos serão ligados permanentemente.
A técnica de DNA recombinante tem um interesse especial se uma das fontes de DNA clivado for um plasmídeo.


Algumas aplicações do DNA reconbinante:

• - InsulinalnterferãoAlbumina sérica humana
  - Hormona humana do crescimento
  - Activador plasminogénico de tecidos
  - Antitrombina
  - Factores de coagulação do sangue
  - Cereais resistentes a doenças
  - Tomates hidropónicos
  - Resistência a pesticidas
  - Bio-insecticidas
  - Vacinas:
  Hepatite B
  Herpes
  Gripe
  Malária.

Manipulação Genética.

Todo o organismo animal ou vegetal é constituído por células, e dentro de cada uma destas existe um núcleo que contem ADN. Os genes, constituintes do ADN, representam cada um uma propriedade específica, isto é, uma única característica.
A manipulação consiste em retirar os genes de uma cadeia de ADN, introduzindo no seu lugar novos genes. A partir daqui temos uma novo organismo geneticamente modificado (OGM), que se irá reproduzir com as características adquiridas.
Há muito que se produz e se consome alimentos geneticamente modificados, os transgénicos. O padrão genético destes é alterado de modo a torná-los mais resistentes a pragas, a conseguir que a produção destes seja mais rápida, etc.

Aula pratica 12/02/2008

Extração do DNA de frutos.

Os frutos utilizados foram o kiwi e o morango.

1. Descasque nos um kiwi e corta nos em cubos e ao morango retirou se as sépalas.
2. Em sacos de congelar coloca nos os frutos mas separados e deepois esmaga nos durante 2 minutos.
3. Coloca nos num balão de erlenmeryer e junta nos agua destilada(100 ml),sal(3 g) e detergente(10 ml). Agita nos suavemente a mistura, para evitar a formação de espuma.
   
4. Junta nos á polpa esmagada do fruto e ainda no interior do saco congelar continua nos a esmagar a mistura.
5. Flitra nos o preparado parar um gobelé com a ajuda de um funil de vidro e gase, para se poder obeter 20 ml de liquido.
6. Cuidadosamente, cpom a ajuda de uma pipeta de plastico fizenos escorrer 20 ml de etanol frio prlas paredes.
7. Deixa nos repousar um pouco até observar a ascensão de uma camada galatinosa.
8. Depois retira nos um pouco de camada galetinosa para observar ao MOC e colocou s uma gota de fucsina básica.